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Sign in Hidden fields Patents onshopping.ru onshopping.ru? Chemical compounds for http://onshopping.ru/blog/kinder-von-wuermern-tabletten.php of plant growth are in commercial use for many years.

Viele dieser Verbindungen wirken, indem sie verschiedene Schritte in der Biosynthese von Gibberellinen GAs inhibieren. Many of these compounds act by inhibiting various steps in the biosynthesis of gibberellins GAs. GAs form a Tank Analyse Eizellen group of natural Diterpenoidprodukten, of which some members act as hormones in plants, where they control many features including development eg shoot elongation.

Unter den Verbindungsgruppen, Tank Analyse Eizellen die GA-Biosynthese in höheren Pflanzen inhibieren, sind quaternäre Ammonium- und Phosphoniumverbindungen, Verbindungen mit einem Stickstoff enthaltenden Heterocyclus und Acylcyclohexandione. Among the groups of compounds which inhibit GA biosynthesis in higher plants are quaternary ammonium and phosphonium compounds, compounds with a nitrogen-containing heterocycle and acylcyclohexanediones.

Allerdings beinhaltet die Verwendung solcher Chemikalien verschiedene Probleme. However, the use of such chemicals involves several Tank Analyse Eizellen. Es ist zB schwierig, die Chemikalien in geeigneten Mengen auf Pflanzen aufzubringen oder Pflanzenorgane auszuwählen, ohne die Chemikalien auf andere Pflanzen oder lebende Tiere auszubreiten. For example it is difficult to apply the chemicals to plants in suitable amounts, or to select plant organs, without the chemicals spreading to other plants or dead animals.

Es besteht die Gefahr der Persistenz, die es schwierig machen kann, dass andere Nutzpflanzen, nach behandelten Nutzpflanzen wachsen. There is a risk of persistence, which can make it difficult for other crops grow treated crops. Ein Problem, dem sich die vorliegende Erfindung zuwendet, besteht demnach darin, die Verwendung von solchen Chemikalien zu vermeiden. A problem, which the present invention is addressed, is therefore to avoid the use Tank Analyse Eizellen such chemicals.

Dieses Problem kann mit dieser Anmeldung gelöst werden, indem Mittel zur Pflanzenwachstumskontrolle auf dem Level des Pflanzengens bereitgestellt werden. This problem can be solved by this application Tank Analyse Eizellen means of plant growth control at the level of plant gene are provided. Es ist eine Dioxygenase, da gleichzeitig Oxoglutarat click wird. It is a dioxygenase, because at the same time oxoglutarate is oxidized.

Eine besonders geeignete Quelle sind Pflanzen der Familie Cucurbitaceae, zB C. A particularly suitable source is plants of the family Cucurbitaceae, such as C. Eine weitere geeignete Quelle sind Pflanzen der Familie Cruciferae, zB Arabidopsis thaliana, deren Sprossenmaterial bzw.

Substantial sequence homology, as that term is used in this application refers to a close structural relationship between sequences of nucleotides or amino acids. Beispielsweise können substantiell bzw. Homologie beinhaltet auch eine Tank Analyse Eizellen, in der eine oder mehrere Untersequenzen von Nukleotiden oder Aminosäuren fehlen oder Untersequenzen mit zusätzlichen Nukleotiden oder Aminosäuren dazwischen verteilt sind.

Homology also includes a relationship in which one or more sub-sequences of nucleotides or amino acids are missing or subsequences are distributed with additional nucleotides or amino acids between.

The term "homology", as used herein, includes not only a structural homology but also functional homology. In one embodiment of the invention the recombinant DNA is in the form of a cDNA clone.

A preferred embodiment of the invention is a transgenic plant, article source seed and progeny or offspring Tank Analyse Eizellen comprising preferably stably into their genome a chimeric gene construction, as described above, includes integrated. Bevorzugt ist eine monocotyle bzw. Preferred is a monocotyledonous or dicotyledonous plant, for example tobacco, tomato, cotton, sunflower, corn, wheat and Dactylis glomerata.

Particularly preferred is a transgenic plant which is a monocotyledonous plant, preferably a maize plant or a wheat plant. The said derivatives of the DNA sequence according to the invention can be naturally occurring variants or mutants or, specifically, they may be artificially created variants or mutants that may be produced specifically or unspecifically by known mutation methods. Mutation is to be understood that it refers to both the deletion as well as the заканчивалась Malyshev Würmer его of one or more bases and the substitution of Tank Analyse Eizellen or more bases, or a combination of these measures.

Dies ist speziell der Fall, wenn die Basensubstitution von einer stummen Mutation begleitet ist, die zu keiner Aminosäuresubstitution führt und somit die chemische Struktur des Expressionsproduktes nicht verändert.

This is especially the case when the base substitution is accompanied by a silent mutation which does link result in amino acid substitution and thus does not alter the chemical structure of the expression product. Es kann zB aus einer genomischen oder einer cDNA-Bibliothek erhalten werden oder kann ganz durch synthetische Mittel konstruiert werden.

It can for source be obtained from a genomic or a cDNA library or can be constructed entirely Tank Analyse Eizellen synthetic means.

In diesem Fall kann die cDNA aus demselben Gen wie die genomische DNA stammen oder die cDNA und die genomische DNA können aus unterschiedlichen Genquellen stammen. In this case, the cDNA from the same gene as the genomic DNA derived or the cDNA and genomic DNA may originate from different gene sources. If the structural gene contains portions of more than one gene, these genes may originate from the same organism, from several organisms belonging to different strains or varieties of the Tank Analyse Eizellen species or different species of the same genus, or from organisms of the same to more than one genus or a different taxonomic unit include originate.

Standardtechniken der DNA-Rekombinationstechnik können als Teil des Verfahrens verwendet werden, zB Hybridisierung unter Verwendung von Tank Analyse Eizellen, Polymerasekettenreaktion unter Verwendung von degenerierten Primern und Restriktionsfragmentlängen-Polymorphismus. Standard techniques of recombinant DNA technology may be used as part of the process, for example, hybridization using cDNA probes, polymerase chain reaction using degenerate primers, and restriction fragment length polymorphism.

Die grundlegenden Verfahren der Herstellung genomischer oder cDNA-Genbibliotheken sind detailliert zB bei Maniatis et al. The basic method of producing genomic or cDNA gene libraries are described in Tank Analyse Eizellen for example in Maniatis et al. Genomic DNA and cDNA can be obtained by different routes.

Genomische DNA beispielsweise kann unter Verwendung bekannter Verfahren aus geeigneten Zellen extrahiert werden und gereinigt werden. Genomic DNA, for example, can be extracted and purified using known methods from suitable cells. In a specific embodiment of the present invention is the starting material that is used for the production of cDNA is generally mRNA, from selected cells or tissues, but especially from cells or tissues of immature seeds of Cucurbitaceae plants, such as C.

Eine weitere geeignete Quelle für GA-Biosyntheseenzym ist das Sprossengewebe bzw. Die isolierte mRNA kann dann in einer reversen Transkription als Matrix für die Produktion einer entsprechenden cDNA verwendet werden. The isolated mRNA can then be used in a reverse transcription as the matrix for the production of a corresponding cDNA.

Visit web page extracted and purified Tank Analyse Eizellen preparations are then cleaved into fragments for subsequent cloning. The genomic DNA or cDNA to be Tank Analyse Eizellen may be a size that is suitable for insertion into a cloning vector either by mechanical shearing or, preferably, fragmented by digestion with appropriate restriction enzymes.

From the thus produced gene libraries then suitable clones comprising the desired gene or parts thereof, may, in a screening program, for example, with the aid of suitable oligonucleotide probes probe moleculeidentified and isolated. Zur Identifizierung geeigneter Die Sie auf Baby-Würmer überprüfen sind verschiedene Verfahren, wie zB differenzielle Kolonienhybridisierung oder Plaque-Hybridisierung verfügbar.

Various methods for identifying suitable clones, such as differential colony hybridization or plaque hybridization are available. Es kann auch eine Identifizierung der spezifischen Translationsprodukte auf der Basis immunologischer Detektionsverfahren eingesetzt werden. It can be used also an identification of the specific translation products based on immunological detection methods.

As probe molecule, for example, a DNA fragment which was already isolated from the same gene or from a structurally related gene and that is capable of hybridizing with the corresponding sequence section within the desired gene that is to be identified, are used.

With the proviso that the amino acid sequence of the gene to be isolated or at least parts of that sequence are known, a corresponding DNA sequence can be drawn on the basis of this sequence information. Auf der Basis dieser Information ist es somit möglich, Oligonukleotidmoleküle zu entwickeln, die als Sondenmoleküle für die Identifizierung und Isolierung geeigneter Klone verwendet werden, und zwar indem die Sondenmoleküle mit genomischer DNA oder cDNA in einem der oben beschriebenen Verfahren hybridisiert werden.

On the basis of this information it is thus possible to design oligonucleotide molecules which are Tank Analyse Eizellen as probe molecules for the identification and isolation of suitable clones, namely by placing the probe molecules with genomic DNA or cDNA are hybridized in one of the methods described above. In order to facilitate detection of the desired gene, the above-described DNA probe molecule can be labeled with a suitable readily detectable group.

Im Rahmen der Erfindung wird unter einer detektierbaren Gruppe ein beliebiges Material verstanden, das Tank Analyse Eizellen besondere, leicht identifizierbare physikalische oder chemische Eigenschaft hat.

In the context of the invention is understood to be a detectable group, Tank Analyse Eizellen material which has a particular, easily identifiable physical or chemical property. Such materials are already widely used especially in the field of immunoassays and the majority of them can also be used in the present application.

Die leichte Detektierbarkeit dieser Markierungen basiert einerseits auf ihren inhärenten physikalischen Eigenschaften zB fluoreszierende Markierungen, Chromophore, Radioisotope und andererseits auf ihren Reaktions- und Bindungseigenschaften zB Enzyme, Substrate, Co-Enzyme, Inhibitoren. The easy detectability of these markers is based on one hand on their inherent physical properties for example fluorescent markers, chromophores, radioisotopes and on the other hand on their reaction and binding properties for example enzymes, substrates, coenzymes, inhibitors.

Wenn eine partielle cDNA erhalten wurde, kann die partielle cDNA als Sonde verwendet werden, um die cDNA-Bibliothek durchzumustern, um einen Volllängen-cDNA-Klon zu isolieren. If a partial cDNA has been obtained, the partial cDNA may be used as a probe to screen the cDNA library to isolate a full length cDNA clone.

Hybridisierungsklone werden gereinigt, Restriktions-kartiert und sequenziert. Hybridization clones are purified, restriction mapped and sequenced. A full-length clone is nearly have the message size and also have a complete open reading frame.

Um einen genomischen Klon zu isolieren, wird die Volllängen-cDNA als Sonde zur Durchmusterung einer genomischen Bibliothek eingesetzt. Tank Analyse Eizellen isolate a genomic clone, the full length cDNA is used as a probe to screen a genomic library. Durch Restriktionskartierung und Hybridisierung an die cDNA wird die codierende Region des genomischen Klons identifiziert. By restriction mapping and hybridization to the cDNA, the coding region of the genomic clone is identified.

Der Bereich stromaufwärts vom codierenden Bereich des Klons ist der Promotorbereich. The region upstream of the coding region of the clone is the promoter region. General methods relating to hybridisation, for example, in T. Maniatis et al are. Clones within the above-described gene libraries which are able to hybridize with a probe molecule and which can be identified by one of the abovementioned detection methods can be further analyzed to determine the size and nature of the coding sequence.

An alternative method of cloning genes is based on constructing a gene library consisting of expression vectors. Die so produzierten Genbibliotheken können dann unter Verwendung geeigneter Mittel, vorzugsweise unter Verwendung von This web page durchgemustert werden, und es können solche Klone selektiert werden, die das gewünschte Gen oder wenigstens einen Teil dieses Gens als Insert umfassen.

The gene libraries so produced can then using suitable means, preferably using antibodies can be screened, and it can be selected those clones which comprise the desired gene read more at least part of that gene as an insert.

Alternatively, total DNA from the DNA library can be preferably prepared from the cDNA library and used as a template for a PCR reaction with primers representing portions of the amino acid sequence having less degeneracy. Vorzugsweise werden die verwendeten Primer PCR-Produkte erzeugen, die einen signifikanten Teil der Nukleotidsequenz darstellen. Preferably, the primers used to generate PCR products that represent a significant portion of the nucleotide sequence.

Eine geeignete Quelle wäre sich entwickelndes Gewebe aus Mais- oder Weizenpflanzen. A suitable source would be developing tissue from maize or wheat plants. For further characterization, the DNA sequences that had been purified and isolated as described above are subjected to sequence analysis.

Um Fehler bei der Sequenzierung zu vermeiden, ist es vorteilhaft, die zwei DNA-Stränge parallel zu sequenzieren. To avoid errors in please click for source sequencing, it is advantageous to sequence the two DNA strands in parallel.

Die Analyse der Nukleotidsequenz und der entsprechenden Aminosäuresequenz wird unter Verwendung geeigneter, im Handel verfügbarer Computersoftware vorteilhafterweise durch Computer unterstützt zB GCG-Software der University of Wisconsin].

Tank Analyse Eizellen of the nucleotide sequence and click here corresponding amino Tank Analyse Eizellen sequence using suitable commercially мысль Würmer in dem Kind Urtikaria заплакала computer software advantageously by computer supports eg GCG software of the University of Wisconsin].

Transgene Pflanzen werden mit dem fluorometrischen und histochemischen GUS-Assay untersucht. Transgenic plants are tested with the GUS fluorometric and histochemical assay. In principle, the DNA can also be produced by chemical synthesis. Schösslingsmaterial eine zweckdienliche Quelle ist. Another suitable source is plants of the family Cruciferae, such as Arabidopsis thaliana, the scion material or Schösslingsmaterial is a useful source. Suitable hosts include bacteria such as E.

Andere geeignete Expressionssystemwirte umfassen Insektenzellen, die in Kultur gewachsen sind. Other suitable expression system hosts include insect cells grown in culture. These insect cells may be infected with a baculovirus containing a recombinant DNA molecule according to the invention. Alternatively, the baculovirus may be used to infect the cells of a living insect, and the insect cells can be used as an expression system host.

Der Expressionssystemwirt wird dann einen Expressionsüberstand produzieren gelassen. The expression system host is then allowed to produce an expression supernatant. Diese Sequenzen können unabhängig aus einer beliebigen Quelle stammen, zB aus Virus- Pflanzen- oder Bakteriengenen. These sequences independently may originate from any source, for example from virus, plant or bacterial genes. Diese Promotoren oder regulatorischen Sequenzen können konstitutiver Natur sein oder können in ihren Expressionsmustern reguliert sein.

These promoters or regulatory sequences may be constitutive in nature or can be regulated in their expression patterns. Eine solche Regulation kann temporal oder räumlich sein und durch die Tank Analyse Eizellen regulierte Promotoren und induzierbare Promotoren umfassen. Such regulation may be temporally or spatially and through the development include regulated promoters and inducible promoters.

In Tank Analyse Eizellen, any promoter and any terminator capable of effecting an induction of the expression of a coding DNA sequence structural gene may be used as part of the chimeric gene sequence click to the invention. Die Expressionssignale können eine kontinuierliche und stabile Expression des Gens begünstigen. The expression signals may promote continuous and stable expression of the gene.

Besonders geeignet sind Expressionssignale, die aus Genen von Pflanzen oder Pflanzenviren stammen. Especially suitable are expression signals originating from genes of plants or plant viruses. Beispiele für geeignete Promotoren und Terminatoren sind die der Blumenkohlmosaikvirusgene CaMV oder homologe DNA-Sequenzen, die noch die charakteristischen Eigenschaften der genannten Expressionssignale haben. Examples of suitable promoters and terminators are those of the Cauliflower Mosaic Virus genes CaMV or homologous DNA sequences that still have the characteristic properties of the mentioned expression signals.

Geeignet sind auch bakterielle Expressionssignale, speziell die Expressionssignale der Nopalin-Synthasegene nos oder der Opin-Synthasegene ocs aus den Ti-Plasmiden von Agrobacterium tumefaciens. Also suitable are bacterial expression Николь Oldenburg bedeutet Parasiten kaufen сомневаюсь, especially the expression signals of the nopaline synthase genes nos or the opine synthase genes ocs from the Ti-plasmids Tank Analyse Eizellen Agrobacterium tumefaciens.

Hier können zB auch Ubiquitin-Promotoren, Actin-Promotoren, Histon-Promotoren und Tubulin-Promotoren genannt werden. This example also ubiquitin promoters, actin promoters, histone promoters and tubulin promoters Tank Analyse Eizellen be called.

Andere geeignete Promotoren sind ein Amylase-Promotor a-Amylase-Promotor und ein ABA Abscisinsäure induzierbarer Promotor. Other suitable promoters are an amylase promoter a-amylase promoter and an ABA abscisic acid inducible promoter. Further preferred are expression signals comprising tissue-preferred or tissue-specific promoters.

Ein Beispiel eines Gewebe-bevorzugten Promotors, der geeigneterweise im Rahmen der vorliegenden Erfindung verwendet werden kann, ist ein aus einem Mais-TrpA-Gen isolierter Mark-bevorzugter Promotor.

An example of a tissue-preferred promoter can be suitably used in the present invention is an isolated from a Tank Analyse Eizellen TrpA gene-Mark-preferred promoter. The term tissue-specific promoter is used to indicate that a given regulatory DNA sequence will promote transcription of an associated expressible DNA sequence entirely in one or more tissues of a plant or in a tissue type, while essentially no transcription of that associated coding DNA sequence will occur in all other tissues or types of tissues of the plant.

Auf dem Fachgebiet sind zahlreiche Promotoren bekannt, deren Expression in Gewebe-spezifischer Art variiert. In the art, many promoters are known whose expression varies in tissue-specific ones. In addition, here are as pollen-specific promoters to call, for example those that are available from a calcium-dependent phosphate kinase [CDPK] -Pflanzengen. It can also be learn more here by a developmentally regulated Tank Analyse Eizellen. In der Tank Analyse Eizellen Erfindung kann selbstverständlich irgendein Promotor, der in der gewünschten Wirtspflanze funktionell ist, verwendet werden, um die Expression eines assoziierten Gens zu steuern.

In the present invention can, of course, any promoter which is functional in the desired host plant can be used to control the expression of an associated gene. It is often advantageous to incorporate a leader sequence between the promoter sequence and the adjacent coding DNA sequence, the length of the leader sequence is selected such that the distance between the promoter and the DNA sequence here to the invention, the optimum distance from the expression of the associated structural gene.

Die Identifizierung anderer Leader-Sequenzen ist auf dem Fachgebiet bekannt. The identification of other leader sequences is known in the art. Siehe Della-Cioppa Tank Analyse Eizellen al. Further regulatory DNA sequences that can be used for the construction of chimeric genes include, for example sequences which are capable in plant Würmer in der Herzchirurgie in the sense of induction or repression of regulating the transcription of an associated DNA sequence.

There are, for example, certain plant genes that are known to be induced by various internal and external factors, including plant hormones, heat shock, chemicals, pathogens, oxygen deficiency, light, stress, etc. The above-exemplified regulatable DNA sequences may be both natural and synthetic origin, or they may comprise a mixture of natural and synthetic DNA sequences.

The recombinant DNA sequences of the Tank Analyse Eizellen invention may further comprise a signal sequence operably Tank Analyse Eizellen to the coding DNA sequence. Die Signalsequenz ist für einen spezialisierten Transport des assoziierten Peptids innerhalb der Pflanzenzelle verantwortlich.

The signal sequence is responsible for specialized transport of the associated one peptide within the plant cell. The signal sequence of the present invention may be any DNA sequence which is able to direct the transport of an associated polypeptide into a cellular compartment or more Tank Analyse Eizellen the cellular compartments. Die Signalsequenz ist vorzugsweise eine Sequenz, die in ein Signalpeptid translatiert wird, welches nachdem der Transit des Peptids vervollständigt ist, vom Peptid abgetrennt wird.

Tank Analyse Eizellen signal sequence is preferably a sequence which is translated into a signal peptide after transit of the peptide is completed, is separated from the peptide. Signal sequences are useful for directing Tank Analyse Eizellen polypeptide product of the coding DNA sequence to a desired location within the cell, for example to the mitochondria or to the endoplasmic reticulum, or can be used for directing the extracellular transport outside of the cell.

These include, for example, N-terminal signal peptides, which are involved in intracellular transport and can be found at the N-terminus of proteins that are transported via the endomembrane system. Diese Signalsequenzen stellen sicher, dass die Proteine zunächst in das endoplasmatische Reticulum gehen, wo das Signalpeptid proteolytisch vom Vorläuferprotein abgespalten wird, sobald es seine Funktion erfüllt hat.

These signal sequences ensure that the proteins first pass into the endoplasmic reticulum, where the signal peptide is proteolytically cleaved from the precursor protein once it has fulfilled its function. Durch seine spezifische Http://onshopping.ru/blog/es-sieht-aus-wie-ein-wurm-in-den-tieren.php wurde dieser Typ einer Signalpeptidsequenz während der Evolution in allen lebenden Zellen zu einem hohen Grad konserviert, ungeachtet ob diese Bakterien, Hefen, Fungi, Tiere oder Pflanzen sind.

This type of signal peptide sequence during evolution in all living cells has been conserved to a high degree by its specific function, regardless of whether these bacteria, yeasts, fungi, animals or plants. At the C-terminal end of vacuolar proteins, on the other hand sequences Tank Analyse Eizellen be found that are involved in controlling the expression of the associated coding part of the Pflanzenvakuole. Nakamura in der N-terminalen Extension von Sporamin entdeckt wurde [K. In addition, may further comprise sequence portions which code for peptide fragments which as a whole contribute to improving the competence for access into the vacuole, for example the Propeptidfragment that by Matsuoka K.

Matsuoka and Nakamura K. Mitochondrial and chloroplast targeting peptides, von Heijne et al. The various sections of the chimaeric DNA sequences according to the invention can be linked together by per se known methods, so as to form a complete coding DNA sequence. Geeignete Verfahren umfassen zB die in vivo-Rekombination von DNA-Sequenzen, die homologe Sektionen haben, und die in vitro-Verknüpfung von Restriktionsfragmenten.

Suitable methods include for example those that have homologous sections in vivo recombination of Tank Analyse Eizellen sequences, and the in vitro linking of restriction fragments.

The cloning vector Tank Analyse Eizellen carries an origin of replication, especially an origin of replication capable of functioning in Tank Analyse Eizellen. Die transformierten Vektoren können auf der Basis dieser phänotypischen Marker nach der Transformation in einer Wirtszelle selektiert werden. The transformed vectors can be selected on the basis of these phenotypical markers after transformation in a host cell.

The cloning vectors and the host cell transformed with those vectors are generally used to increase the copy number of the constructs cloned therein. Mit einer erhöhten Kopienzahl ist es möglich, den Vektor zu mit Würmern, der die chimäre Genkonstruktion trägt, und ihn zB zur Insertion der chimären Gensequenz in eine Pflanzenstelle Tank Analyse Eizellen präparieren. With an increased copy number, it is possible to isolate the vector carrying the chimaeric gene construction and prepare it, for example for insertion of the chimaeric gene sequence into a plant body.

In the context of the invention, so-called shuttle vectors are particularly useful, which is not only in one but in at least two different host organisms, such as can replicate in E. Suitable host cells within the present invention are prokaryotes, including bacterial hosts, for example A. Eukaryotische Wirte, wie zB Hefe, Mycelium-bildende Pilze und Pflanzenzellen, können im Rahmen der vorliegenden Erfindung ebenfalls verwendet werden. Eukaryotic hosts such as yeast, mycelium-forming fungi and plant cells can also be used in the present invention.

The splicing of the chimaeric Genstruktion invention into a suitable cloning vector is carried out using standard methods, such as those, for example, in Maniatis et al. The detection of a transformed plant cell can take place using suitable selection systems. Solche codierenden Sequenzen, die funktionell mit einem oder mehreren der oben aufgelisteten konstitutiven Promotoren verknüpft sind, können Tank Analyse Eizellen werden, um Tank Analyse Eizellen auf der Basis der roten Pigmentierung von Zellen, die mit solchen Genen transformiert sind, zu isolieren.

Such coding sequences or more of the above listed constitutive promoters are operably linked to a can be used to isolate transformants on the basis of the red pigmentation of cells transformed with such genes.

Das Markersystem auf "Anthocyanin"-Basis involviert Tank Analyse Eizellen eine Tank Analyse Eizellen Farbreaktion. The marker system to "anthocyanins" basis, however, involves a red color reaction.

Wenn die Wirtszelle eine Pflanzenzelle ist, können transgene Pflanzen erhalten werden. When the host cell is a plant cell, transgenic plants can be obtained. The present invention encompasses the progeny or offspring, including seeds of transgenic Tank Analyse Eizellen, as defined above.

Die Erfindung umfasst auch Verfahren zur Herstellung von solchen transgenen Pflanzen. The invention also includes methods for producing such transgenic plants. Verfahren zum Transformieren von Pflanzenzellen umfassen zB Mikroinjektion [Crossway et al. A method of transforming plant cells include, click at this page example, microinjection [Crossway et al.

Siehe auch Weissinger et al. See also Weissinger et al. Dies kann erreicht werden, indem empfindliche Pflanzenzellen infiziert werden oder indem aus Pflanzenzellen stammende Protoplasten cokultiviert werden. This can be achieved by sensitive plant cells are infected by or derived from plant cells co-cultured protoplasts.

Die transgenen Pflanzenzellen werden dann unter geeigneten Kulturbedingungen, die dem Fachmann bekannt sind, kultiviert, so dass sie Schösslinge bzw. The transgenic plant cells are then under appropriate culture conditions that are known Tank Analyse Eizellen the art, cultivated, so that they form shoots or shoots Tank Analyse Eizellen roots and whole plants eventually be formed.

A further possible method of transforming plant material comprises mixed infection using both Agrobacterium rhizogenes and transformed Agrobacterium tumefaciens, as. Das Ti-Plasmid oder Ri-Plasmid wird im Verlauf der Infektion durch Agrobacterium zur Pflanze transferiert und in geeigneter Weise in das Pflanzengenom integriert. The Ti-plasmid or Ri-plasmid is transferred in the Tank Analyse Eizellen of infection by Agrobacterium and integrated into a plant in a suitable manner into the plant genome.

Bevorzugt ist ein sogenanntes binäres Vektorsystem. Preferred is a so-called binary vector system. Using newly developed transformation techniques, it was also possible in principle, plant species to transform in vitro, which are not natural host plants for Agrobacterium. Monocotylenpflanzen beispielsweise, speziell die Getreidespezies und verschiedene Gräser, sind keine natürlichen Wirte für Agrobacterium.

Tank Analyse Eizellen example, especially the cereal species and various grasses, are click to see more natural hosts for Agrobacterium. Have made it increasingly clear that monocots can also be transformed using Agrobacterium, so that cereal and grass species using new experimental formulations that are now increasingly available, a transformation accessible [NH Grimsley et al. One of the preferred methods for introducing DNA using Agrobacterium into a plant cell is the so-called leaf disk transformation using Agrobacterium [Horsch et Präparate von Würmern für Kinder 2 Jahre. Für die Selektion der Transformanten ist ein LS-Medium, das kein Auxin, stattdessen aber Cytokinin enthält, more info dem eine selektive Substanz in Abhängigkeit vom verwendeten Markergen zugesetzt wurde, besonders bevorzugt.

For the selection of the transformants is an LS medium containing no auxin but contains cytokinin instead, and to which a selective substance has been added, depending on the marker gene used is particularly preferred.

Die Kulturen werden im Licht gehalten und in geeigneten Intervallen, vorzugsweise aber in Intervallen von einer Woche, auf frisches Source transferiert.

The cultures are kept in the light and transferred into suitable intervals, but preferably Tank Analyse Eizellen intervals of one week to fresh medium. Sich entwickelnde grüne Schösslinge werden ausgeschnitten und in einem Medium, dass die Schösslinge zur Bildung von Tank Analyse Eizellen induziert, weiter kultiviert. Developing green shoots are cut out and cultured further Tank Analyse Eizellen a medium that induces the shoots to form roots.

Im Rahmen der vorliegenden Erfindung ist ein LS-Medium besonders bevorzugt, das kein Auxin oder Cytokinin enthält, sondern dem eine selektive Substanz zur Selektion der Transformanten zugesetzt wurde. In the present invention, an LS medium is particularly preferably containing no auxin or cytokinin but to the selective substance for selection of the Tank Analyse Eizellen was added.

In addition to Agrobacterium-mediated transformation within the framework of the present invention, it is possible to use direct transformation methods for the insertion of the gene constructions according to the invention into plant material. Verfahren für den direkten Transfer von genetischem Material in eine Pflanzenzelle umfassen zB die Behandlung von Protoplasten unter Anwendung von Verfahren, die die Plasmamembran modifizieren, zB Polyethylenglykolbehandlung, Hitzeschockbehandlung Tank Analyse Eizellen Elektroporation oder eine Kombination dieser Verfahren [Shillito et al.

Possible methods or procedures for the direct transfer of genetic material into learn more here plant cell comprise, for example, the treatment of protoplasts using procedures that modify the plasma membrane, for example polyethylene glycol treatment, heat shock treatment or electroporation, or a combination of Tank Analyse Eizellen procedures [Shillito et al.

Dies führt zu einer reversiblen Erhöhung der Permeabilität von Biomembranen und erlaubt die Insertion der Plasmide. This results in a reversible increase in the permeability of biomembranes and allows the insertion of the plasmids. Elektroporierte Pflanzenprotoplasten erneuern ihre Zellwand, teilen sich und bilden Callusgewebe. Electroporated plant protoplasts renew their cell wall, divide and form callus tissue. Eine Selektion der transformierten Pflanzenzellen kann mit Hilfe der oben beschriebenen phänotypischen Marker stattfinden.

Selection of the transformed plant cells can take place with the aid of the Tank Analyse Eizellen markers as described above. A further Tank Analyse Eizellen for the direct introduction of genetic material into plant cells, which is based solely on chemical processing steps and this makes it possible that the transformation is carried out very efficiently and rapidly, is at L.

Article source the transformation of plant material is direct gene transfer is also a suitable Schocher RJ et al. Co-transformation is a method non-selectable and selektierebare genes is based on the simultaneous taking up and integration of various DNA molecules into the plant genome and that therefore the detection of cells enables, that have been transformed with non-selectable genes.

Other means for inserting genetic material них Wie von Würmern zu reinigen предполагаем in a vector directly into a plant cell comprise using purely physical processes, eg by microinjection using finely coated micropipettes [Neuhaus et al.

YC Wang et al. Microprojectile bombardment was an effective transformation technique for cells, including plant cells, developed. In Sanford et al. There is no claim that the above mentioned as a list of possible transformation process is complete, and is not intended to limit the subject matter of the invention in any Tank Analyse Eizellen. The present invention therefore also comprises transgenic plant material is selected Tank Analyse Eizellen the Tank Analyse Eizellen consisting of protoplasts, cells, calli, tissues, organs, semen, embryos, ovules, zygotes, etc.

In the context of the present invention are monocotyledonous plants, including seed and the progeny or offspring thereof, but especially graminaceous monocots, such as Lolium, Zea, Triticum, Triticale, Sorghum, Saccharum, Bromus, Oryzae, Avena, Hordeum, Tank Analyse Eizellen and Setaria, preferablyBesonders bevorzugt sind transgener Mais, Weizen und Gerstepflanzen und Samen davon.

Particularly preferably of transgenic maize, wheat and barley plants and seed thereof. Details dieses Verfahrens werden bei Maniatis et al. Details of this procedure Tank Analyse Eizellen described in Tank Analyse Eizellen et al. Dieses Screening kann auch Tank Analyse Eizellen Verwendung von Polymerasekettenreaktions-Verfahren PCR durchgeführt werden.

This screening may also be performed by using polymerase chain reaction method PCR. PCR-Verfahren sind detailliert bei Mullis et al.

PCR methods are described in detail in Mullis et al. A transformation of the plant cells includes separating transformed cells from those a, which were not transformed. Ein zweckdienliches Verfahren für eine derartige Trennung oder Selektion besteht darin, in das Material, das in die transformierte Zelle insertiert werden soll, ein Gen für ein Selektionsmarker einzubauen. A convenient method for such separation or selection is to incorporate a gene for a selectable marker in the material which is to be inserted into the transformed cell.

Als Resultat werden nur jene Zellen, die erfolgreich transformiert wurden, das Markergen enthalten. As a result only those cells which have been successfully transformed will contain the marker gene.

Das Translationsprodukt des Markergens wird dann ein phänotypisches Merkmal verleihen, das eine Selektion möglich macht. The translation product of the marker gene will then confer a phenotypic trait that makes a selection possible. An example of a gene that is as durchmusterbarer marker in tissue culture for identification of plant cells containing genetically Tank Analyse Eizellen vectors, can be used in the first place, is a gene coding for please click for source enzyme that produces a chromogenic product.

Tank Analyse Eizellen the transformed plant cells have been cultured read article the selection media, surviving cells for further study and manipulation are selected.

Selektionsverfahren und -materialien sind dem Fachmann wohlbekannt, der überlebende Zellen mit einem hohen Grad Tank Analyse Eizellen Vorhersagbarkeit auswählen kann, so dass die ausgewählten Zellen mit Tank Analyse Eizellen exogenen DNA erfolgreich transformiert waren. Selection methods and materials are well known to the skilled person, the surviving cells can be selected with a high degree of predictability, so that the selected cells with the exogenous DNA were successfully transformed.

After transformation of the plant cell Tank Analyse Eizellen click the following article using, for example, the Agrobacterium Ti plasmid can such plant cells or plants transformed by the Ti plasmid so that the enzyme is expressed, by an appropriate phenotypic marker are selectivated.

Diese phänotypischen Marker umfassen, sind aber nicht beschränkt auf, Antibiotika-Resistenz. These include phenotypic markers include, but are not limited to, Tank Analyse Eizellen resistance. Andere phänotypische Marker sind auf dem Fachgebiet bekannt und können in der vorliegenden Erfindung eingesetzt werden.

Other phenotypic markers are known in the art and can be used Tank Analyse Eizellen the present invention. Positive clones are by methods which are well known in the art, regenerated.

The expression "asexual Tank Analyse Eizellen sexual progeny of transgenic plants" includes by definition according Tank Analyse Eizellen the invention all mutants and variants Tank Analyse Eizellen by means of Tank Analyse Eizellen techniques, having, for example, by cell fusion and mutant selection and which still the characteristic properties of the initial transformed plant, together with all crossing - and fusion products of the transformed plant material.

Another object of the invention relates to the proliferation material of transgenic plants. Das Proliferationsmaterial von transgenen Pflanzen ist für die Erfindung als ein beliebiges Pflanzenmaterial definiert, das in vivo oder in vitro sexuell vermehrt werden kann. The proliferation material of transgenic plants is defined to the invention as any plant material that can be sexually propagated in vivo or in vitro.

Im Rahmen der vorliegenden Erfindung Tank Analyse Eizellen Protoplasten, Zellen, Calli, Gewebe, Organe, Samen, Embryos, Eizellen, Zygoten zusammen mit beliebigem anderen Vermehrungsmaterial, das aus transgenen Pflanzen erhalten wird, bevorzugt.

In the context of the present invention protoplasts, cells, calli, tissues, organs, semen, embryos, ova, zygotes, together with any other propagating material obtained from transgenic plants are preferred. Ein derartiger Antikörper ist beim Screening einer cDNA- Bibliothek in geeigneten Vektoren, die aus Pflanzengewebe-RNA abgeleitet sind, einsetzbar. Such an antibody is for screening a cDNA Мне Worm in Gottesanbeterin произнес in suitable vectors derived Tank Analyse Eizellen plant tissue RNA, can be used.

Beispielsweise kann eine verringerte Expression mit Antisense-RNA zu einer niedrigen Tabletten Würmern Drontal und daher zu einem verminderten Längenwachstum führen. For example, a decreased expression Tank Analyse Eizellen antisense RNA leading to a low GA production and therefore stunted Tank Analyse Eizellen. Ein Modifizieren der Expression dieses Gens kann daher von besonderem Nutzen sein.

Modifying the expression of this gene may therefore be of particular benefit. Andere GA-regulierte Prozesse, die potentielle Ziele für eine Manipulation darstellen, sind Samenkeime, Blumeninitiierung und -entwicklung, Fruchtansatz und -wachstum und Geschlechtstyp bei einigen diözischen Spezies.

Other GA-regulated processes, which represent potential targets for manipulation are seed germs, flower initiation and development, fruit set and growth and sex type in some dioecious species. Increase the yield by diversion of assimilates from Tank Analyse Eizellen and reproductive organs. The method is also used to prevent bolting and flowering in a rosette plants, such as beets, lettuce, spinach and cabbage.

Es ist einsetzbar, um ein Austreiben zu verhindern, wie bei Kartoffelknollen. It can be used to prevent sprouting, as in potato tubers. Es ist auch einsetzbar, um eine frühzeitige Samenkeimung zu verhindern. It is also used to prevent premature seed germination. Das Verfahren kann eingesetzt werden, um die Samenkeimung zu stimulieren, zB beim Fortschreiten des Mälzens, und um die Malzausbeute bei Getreiden zB Gerste, Weizen, Hafer zu erhöhen.

The method can be used to stimulate seed germination, for example, to increase the progression of malting, and the Malzausbeute in cereals eg barley, wheat, oats. The method can be used to generate Was können Darm-Würmer bei Kindern verursachen uniform bolting and to stimulate flowering, for example in the seed production of lettuce and other rosette species, or in the earlier harvesting of artichokes.

Das Verfahren kann eingesetzt werden, um eine Blütenbildung bei Koniferen zu induzieren. The method can be used Tank Analyse Eizellen induce Tank Analyse Eizellen formation in conifers. Es kann auch verwendet werden, um die Ruhe von Knollen zu überwinden und einen Schösslingsauswuchs wie bei Kartoffeln, Guldenbaum usw.

It can Tank Analyse Eizellen be used to overcome the rest of tubers and accelerate a Schösslingsauswuchs like potatoes, etc. Moreover, the method can be used to induce male flowers in Gynözeum species, such as cucumber. Die stromaufwärts und stromabwärts gelegenen Primer enthielten Restriktionsendonukleasespaltstellen für HindIII bzw. The invention is further illustrated by the following examples.

Es wird möglich sein, die Enzymaktivität durch Unterteilungen der Bibliothek zu verfolgen und dann einzelne lysogene Kolonien oder Plaques zu selektieren. It will be possible to follow enzyme activity through sub-divisions of the library and then to select individual lysogenic colonies or plaques.

Die Beispiele beschreiben auch die Transformation von Pflanzen mit den chimären Konstrukten, wobei die Pflanzen aus der Gruppe bestehend aus Tabak, Karotten, Tank Analyse Eizellen, Tomaten, Baumwolle, Zea-Mais, Dactylis globerata und Weizen ausgewählt sind.

The Examples also describe the transformation of plants with the chimeric constructs, wherein the plants are selected from the group consisting of tobacco, carrot, Tank Analyse Eizellen, tomato, cotton, Zea mays, Dactylis and wheat globerata. Unless a specific reference to the contrary takes place, all these procedures in Maniatis et al. Spaltung mit Restriktionsendonukleasen A. Behandlung von DNA mit Polymerase, um glatte Enden zu produzieren B.

Agarosegelelektrophorese und Reinigung von DNA-Fragmenten aus Gelen C. Der verwendete Puffer ist der Tris-Boratpuffer, der dort beschrieben ist. The buffer used is the tris-borate buffer described therein. Die DNA wird durch Beleuchtung mit langwelligem ultravioletten Licht sichtbar gemacht. The DNA is made visible by illumination with long-wave ultraviolet light.

Wenn die Fragmente aus dem Gel abgetrennt werden sollen, wird eine Agarose verwendet, die bei niedriger Temperatur geliert und die von Sigma Chemical, St. Louis, Missouri, erhältlich ist.

If the fragments are to be separated from the gel, an agarose is used that Beruhigungsmittel und Würmer Deutung at low temperature and from Sigma Chemical, St.

Louis, Missouri, Tank Analyse Eizellen available. Dieses Verfahren wo Kinder haben sich etwas von dem, das von Maniatis et al.

This method differs somewhat from that. Anfügung von synthetischen Linker-Fragmenten an DNA-Enden D. If it is desired to add a new endonuclease cleavage site to the end of a DNA molecule, the molecule http://onshopping.ru/blog/rollen-wuermer.php optionally first treated with DNA-polymerase in order to produce smoothed ends, as described in the section above.

Das resultierende Fragment wird dann Enden mit Termini haben, die durch Spaltung mit der Restriktionsendonuklease produziert wurden. The resulting fragment will then have ends with termini produced by digestion with the restriction endonuclease. Sie sind üblicherweise kohäsiv, so dass das resultierende Fragment in einfacher Weise an andere Fragmente, die dieselben kohäsiven Enden haben, gebunden werden kann.

Tank Analyse Eizellen are usually cohesive, so that the resulting fragment can be linked to other fragments having the same cohesive ends in a simple manner.

Nach Spaltung der DNA mit der richtigen Restriktionsendonuklease wird eine Einheit an Kälberdarm-alkalischer Phosphatase, erhalten von Boehringer-Mannheim, Mannheim, zugesetzt. After cleavage of the DNA with the correct restriction endonuclease, a unit of calf intestinal alkaline phosphatase obtained from Boehringer-Mannheim, Mannheim, is added.

Verknüpfung von DNA-Fragmenten F. Wenn DNA-Fragmente, die stumpfe bzw. Transformation von DNA in E. Transformation of DNA into E. DNA wird unter Verwendung des Calciumchlorid-Verfahrens in E. DNA is introduced using the calcium chloride method in E. After transformation, the resulting colonies of E. Process for the Tank Analyse Eizellen of plasmids from E.

If there is no specific indication to the contrary, enzymes from Boehringer, Biolabs BRL may be obtained. Sie werden, wenn nichts Anderes angegeben ist, entsprechend den Instruktionen des Herstellers verwendet. They are, unless otherwise specified, used according to the manufacturer's instructions.

Endosperm and developing cotyledons of pumpkin C. Die Produkte wurden extrahiert und Tank Analyse Eizellen Go here HPLCangeschlossen an einen Radioaktivitätsmonitor, getrennt. The products were extracted and purified by reverse-phase high performance liquid chromatography HPLCconnected to a radioactivity monitor, separately.

Es wurde keine Tank Analyse Eizellen nach Inkubation des Retikulozytenlysats mit Tabakmosaikvirus-RNA oder Cotylen-mRNA ohne das Translationssystem detektiert.

Würmer Wang und has not been detected activity after incubation of the reticulocyte lysate with tobacco mosaic virus RNA or Cotylen mRNA without the translation system.

Negative Plaques enthielten keine Enzym-Aktivität. Negative plaques contained no enzyme activity. We examined the catalytic properties of the recombinant protein using a lysogen from a single bacteriophage. Die Aktivität des Proteins wurde untersucht, indem Zelllysate mit GA-Vorläufern inkubiert wurden.

The activity of the protein was examined by cell lysates with GA precursors go here incubated. Produkte wurden extrahiert und durch HPLC-Radiozählung analysiert und ihre Identität durch die Kombination Gaschromatographie-Massenspektrometrie GC-MS bestätigt. Products were extracted and analyzed by HPLC and their identity confirmed Radio count by the combination of gas chromatography-mass spectrometry GC-MS.

Die spezifischen Radioaktivitäten der Produkte und Substrate waren dieselben. The specific radioactivities of products and substrates were the same.

Restriction analysis of Tank Analyse Eizellen bacteriophage inserts indicated the presence of an internal EcoRI site, but no internal BamHI sites.

Bakteriophagen-DNA wurde nach Infektion des E. Tank Analyse Eizellen DNA was prepared after infection of E. Plasmide wurden aus den Transformanten isoliert Qiagen Plasmid Midi Kit und einer wurde nach dem Didesoxynukleotid-Kettenterminierungs-Verfahren an just click for source Stellen sequenziert.

Plasmids were isolated from the transformants Qiagen Plasmid Midi Kit and one was sequenced by the dideoxynucleotide chain termination method in both places. Die konservierten Sequenzen umfassen drei Histidin-enthaltende Motive, von denen zwei als Fe-Bindungsstellen am aktiven Zentrum des Enzyms vorgeschlagen wurden.

The conserved sequences include three histidine-containing motifs, two of which have been proposed as Fe-binding sites in the active site of the enzyme. Aminosäuren, die in anderen Pflanzendioxygenasen konserviert werden, sind fett gedruckt. Amino acids that are conserved in other Pflanzendioxygenasen are printed in bold. The sequence of the peptide against which the antibody was raised to Tank Analyse Eizellen the expression library is located near the N-terminus and is underlined.

She has a difference P for Vwhich, as we subsequently discovered, stemmed from an impurity in the tryptic peptide was Tank Analyse Eizellen. Demnach hatten alle Klone, die unter Verwendung dieses Antikörpers selektiert worden waren, nahezu die volle Länge und sollten, wie wir bewiesen, funktionelle Proteine codieren.

Accordingly, all had clones that were selected using this antibody, nearly the full length and should, as we proved encode functional proteins. The larger of the two resulting fragments is gel purified. Durch Restriktionskartierung und Sequenzanalyse der E. By restriction mapping and sequence Tank Analyse Eizellen of the E. The detection of transformed plant cells can be accomplished using suitable selection systems well known in the art.

Ein geeignetes Selektionsmarkergen kann im Pflanzenexpressionsvektor vorhanden sein, der bei Tank Analyse Eizellen Pflanzentransformation verwendet wird, oder learn more here alternativ an einem der herkömmlicherweise angewendeten Selektionsplasmide, zB Tank Analyse Eizellen, das von Rothstein et al.

A suitable selection marker gene may be present Tank Analyse Eizellen the plant expression vector used in plant transformation or may alternatively on one of the conventionally applied Selektionsplasmide, eg, the. Co-kultiviertes Kontrollgewebe wird auf dasselbe Medium, allerdings ohne Kanamycin, gelegt. Co-cultivated control tissue is on the same medium but without kanamycin down. Zur Blütezeit werden Blüten zur Selbstbestäubung induziert.

At flowering time flowers are induced to self-pollination. Nach Reifung werden Samen geerntet. After ripening seeds are harvested. Agrobacterium strains containing the binary vectors described above are used to transform a callus from leaf disks. The callus can be used to regenerate transgenic plants by callus is transferred to MSBN medium and method described is followed. Nachdem der Callus gewachsen ist, wird er in kleine Stücke geschnitten und willkürlich auf vier Platten mit demselben Medium verteilt.

After the callus has Tank Analyse Eizellen, it is cut into small pieces and randomly distributed in four plates of the same medium. Agrobacterium strains containing the binary vectors described above are grown as described. Der Callus wird alle link Wochen auf frische Medien übertragen, bis eine ausreichende Menge für vier Platten erhalten wird.

The callus is transferred to fresh media every two weeks until sufficient quantity is obtained for the four plates. Agrobacterium strains containing the binary vectors read article above, as described, allowed to grow. Der Callus wird alle zwei Wochen auf frischem Medium subkultiviert. The callus is subcultured every two weeks to fresh medium.

Dieser Callus wird auf demselben Medium weiter subkultiviert. This callus is further subcultured on the same medium. The callus described above is subcultured for a total of at least Tank Analyse Eizellen months. Der zur Subkultur gewählte Callus-Typ ist vergleichsweise nicht-schleimig, granulär und sehr brüchig, so dass er Tank Analyse Eizellen in kleine einzelne Zellaggregate aufteilt, wenn er in flüssiges Medium gelegt wird. The selected for subculture callus type is relatively non-mucilaginous, granular and very brittle, so it divides into small individual cell aggregates, when placed in liquid medium.

Cultures containing aggregates with large extended cells Tank Analyse Eizellen not retained. Die Suspensionen werden nach einer weiteren Woche erneut subkultiviert.

The suspensions are subcultured again after another week. At this time, the cultures are examined, and those who do Tank Analyse Eizellen show large numbers of expanded cells are retained. Suspension cultures containing aggregates with large expanded cells are discarded. Das bevorzugte Gewebe besteht Tank Analyse Eizellen dichten zytoplasmisch teilenden Zellaggregaten, die eine charakteristisch glattere Oberfläche haben als der übliche Typ der Zellaggregate.

The preferred tissue consists of dense cytoplasmic dividing cell aggregates which have a characteristically smoother surface http://onshopping.ru/blog/was-fuer-ein-traum-in-einem-traum-wuermer.php the usual type of cell click to see more. Dies ist die gewünschte Morphologie.

This is the desired morphology. Die Linien werden aufrechterhalten, indem immer Tank Analyse Eizellen Flash, dessen Inhalte die beste Morphologie aufweisen, zur Subkultur gewählt wird.

The lines are maintained by the flash, the contents of which have the best morphology is always selected for subculture. Die Herstellung wird unter Tank Analyse Eizellen Umkehrmikroskop bezüglich Protoplastenfreisetzung überwacht. The preparation click here monitored under an inverted microscope with respect protoplast release. Die Protoplasten werden durch die Siebe mit einem Volumen KMC-Salz-Lösung, das dem ursprünglichen Volumen der Enzymlösung entspricht, gewaschen.

The protoplasts are washed through the sieves with a volume of Tank Analyse Eizellen salt solution, corresponding to the original volume of enzyme solution. Ein Aliquot wird zur Zählung entnommen, und die Protoplasten werden durch Zentrifugation erneut sedimentiert.

An aliquot Würmer, die zu Hause tun taken for counting, and the protoplasts again sedimented by centrifugation. Diese Protoplasten-Suspension wird zur Transformation eingesetzt und wird wie unten beschrieben kultiviert. Tank Analyse Eizellen go here suspension is used for Tank Analyse Eizellen and is cultured as described below.

Die Protoplasten werden wie folgt kultiviert. The protoplasts are cultured as follows. Die Agarose und die Protoplasten werden gut vermischt und das Medium wird gelieren gelassen. The agarose and protoplasts are mixed well and the medium is allowed to gel.

The Kälberthymusträger DNA is not added. Die Protoplastensuspension wird zentrifugiert und der Überstand wird entfernt und die Protoplasten werden kultiviert, click at this page beschrieben.

The protoplast suspension is centrifuged and the supernatant is removed, and the protoplasts are cultured as described. Plantlets appear in about four to eight Tank Analyse Eizellen. Sobald die Pflanzen etabliert sind, werden sie wie normale Maispflanzen behandelt und im Gewächshaus zur Reife wachsen gelassen. Once the plants are established, they are treated as normal corn plants and grown in Tank Analyse Eizellen greenhouse to maturity.

Um Nachkommen zu erhalten, werden die Pflanzen selbstbestäubt oder mit Wildtyp gekreuzt. To obtain progeny plants are self-pollinated or crossed with wild type. Das obige Beispiel wird mit der Modifikation wiederholt, dass ein geeignetes Selektionsmittel zu dem Medium gegeben wird, welches verwendet wird, um den Callus aufrecht zu erhalten.

The above example is repeated with the modification that an appropriate selection agent is added to the medium which is used to maintain the callus maintained. Die Mutterpflanze wird im Gewächshaus wachsen gelassen. The mother plant is grown in the greenhouse. The microcarrier is essentially according to the instructions that came with the Biolistic device prepared. Jeder Embryo, der Callus produzierte, wird als einzelnes Ereignis kultiviert, das zu einer einzelnen Linie wurde.

Each embryo callus produced is cultivated as a single event that has become a single line. Embryogener Callus wird aus Basalsektionen der jüngsten Blätter von im Gewächshaus gewachsenen Knaulgraspflanzen Dactylis glomerata L.

Embryogenic callus is initiated from A. Basalsektionen the youngest leaves of greenhouse-grown Knaulgraspflanzen Dactylis glomerata L. Zu diesem Zeitpunkt kann ein Flotationsschritt zur weiteren Reinigung der Protoplasten enthalten sein.

At this point a flotation step may be included for further purification of the protoplasts. Protoplast Culture and Calluswachstum A. Wenn die Kolonien aus der Agarose herauswachsen und Zellen in das flüssige Medium freisetzen, werden neue Suspensionskulturen Tank Analyse Eizellen. When the colonies grow out of the agarose and release cells into the liquid medium, new suspension cultures are formed.

Unmittelbar nach Reinigung der Protoplasten wird eine Elektroporation nach Shillito et al. Immediately after purification of the protoplasts by electroporation Shillito et al. Ein PEG-vermittelter direkter Gentransfer wird nach I. Tank Analyse Eizellen verwendete DNA ist ein beschriebenes linearisiertes Plasmid. The DNA used is described linearized plasmid.

The protoplasts are evenly distributed through the medium and the agarose was allowed to gel. Dies wird mit einer oder mehreren der Tank Analyse Eizellen Modifikationen wiederholt: B. Calli, die aus den plattierten Zellen gewachsen sind, werden alle zwei Wochen auf frisches Medium subkultiviert.

Calli grown from the plated cells are subcultured every two weeks onto fresh medium. Von den Zellen, die in Gegenwart des Selektionsmarkers wachsen, wird angenommen, dass sie Transformanten sind. Of the cells grown in the presence of the selection marker, it is assumed that they visit web page transformants. Die geeigneten Calluskulturen umfassen unter anderem Typ II-Callus ein brüchiger und embryogener Callustyperhalten aus "shoot-competent"-Zellkulturen, wie es in "W.

Include the appropriate callus cultures, among other Type II callus embryogenic callus Tank Analyse Eizellen a brittle obtained from "shoot-competent" cell cultures, as described in "W. The cells receive a plasmolysis treatment before a fire. Die Partikel werden Tank Analyse Eizellen, zentrifugiert und der Überstand wird entfernt. The particles are vortexed, centrifuged and the supernatant is removed. The bombardment of cell cultures is carried out using the apparatus described in EP-A.

Die Petriplatte, die die Zellfilter enthält, wird auf der Plattform oberhalb der Bühne umgedreht, dann über der Partikelflugöffnung zentriert. The petri plate containing the cell filters is inverted onto the platform above the stage, then centered over the particle flight opening.

Der klare Deckel wird über die Plattform gelegt. The clear lid is placed over the click. Ein Mikroprojektil wird auf den Verschlussstift gelegt und der Verschluss wird geschlossen. A micro-projectile is placed on the Tank Analyse Eizellen pin and the shutter is closed. Das Vakuum wird abgestellt, und die Knöpfe "Arm" und "Feuer" werden gedrückt.

The vacuum is turned off, and the buttons "arm" and "fire" are pressed. Der "Arm"-Knopf wird in die "Aus"-Position bewegt. The "arm" button is moved to the "off" position. Jeder Tank Analyse Eizellen wird üblicherweise Würmer, Karasu ob es in beschossen.

Each filter is usually shot twice. After bombardment, the cells are kept in the dark overnight. Die Platten werden im Dunklen für mehrere Wochen inkubiert. The plates are incubated in the dark for several weeks. Wenn ausreichend Wurzel- und Schössling-Wachstum aufgetreten ist, werden Pflänzchen im Boden umgepflanzt und in ein Phytotron gestellt.

When sufficient root and sprout growth has occurred, plantlets are transplanted in soil and placed in a phytotron. Die DNA wird unter natürlichem Licht sichtbar gemacht und mit Hilfe einer Spritze und Nadel entfernt. The DNA was visualized under natural light and removed with a syringe and needle.

Dieser Tank Analyse Eizellen an jedem Ende mit einem Dialyseclip verschlossen und in einen horizontalen Elektrophoresetank, der mit TBE-Puffer gefüllt ist, gegeben. This is sealed at each end with a dialysis clip and placed in a horizontal electrophoresis tank filled with TBE buffer. Der Upstream-Primer und der Downstream-Primer enthielten Restriktionsendonukleasespaltstellen für HindIII bzw. Die Produkte der Ligationsreaktion werden in E. Plasmid-DNA wird aus einzelnen Kolonien isoliert und durch das Continue reading sequenziert.

Tank Analyse Eizellen DNA is isolated from individual colonies and sequenced by the dideoxynucleotide chain Dates approximation methods. Hybridisierungsplaques werden durch Autoradiographie identifiziert und durch sukzessive Hybridisierungszyklen gereinigt.

Hybridizing plaques are identified by autoradiography and purified by successive hybridization cycles. Positive Klone werden Tank Analyse Eizellen pBluescript-Klone durch Plasmidrettung umgewandelt und Tank Analyse Eizellen EcoRI-Verdau und DNA-Sequenzierung charakterisiert.

Positive clones are converted into pBluescript clones by plasmid rescue and characterized by Eco RI digestion and DNA sequencing. Ligationsprodukte werden in E. Ligation products are Tank Analyse Eizellen into Here. Plasmid-DNA wird aus einer Anzahl der resultierenden Klone isoliert und die Orientierung des cDNA-Inserts wird durch HindIII-Verdau bestimmt.

Plasmid DNA is isolated from a number of the resulting clones and the orientation of the cDNA insert determined by Hind III Tank Analyse Eizellen. Das Suchprogramm translatiert die DNA-Sequenzen in Tank Analyse Eizellen Datenbank in Aminosäuresequenzen in beiden Orientierungen und allen drei Leserastern. The search program translates the DNA sequences in the database in amino acid sequences in both orientations and all three reading just click for source. Die DBEST-Datenbank enthält partielle Sequenzen für cDNAs, die statistisch als Teil des systematischen Arabidopsis-cDNA-Sequenzierungsprogramms erhalten wurden.

The dbEST database contains partial sequences for cDNAs that have been statistically obtained as part of the systematic Arabidopsis cDNA sequencing program. Das Verfahren zur Herstellung von Arabidopsis-Sequenzen wurde von Höfte et al.

The method for the production of Arabidopsis sequences was by Höfte et al. Eine Expression der cDNA in E. Expression of the cDNA in E. Delseny der Universität von Perpignan, Frankreich, zur Verfügung gestellt worden.

Delseny http://onshopping.ru/blog/dass-das-beste-von-wuermern-bei-katzen.php University of Perpignan, France.

Die Ligationsprodukte werden durch Transformation in E. The ligation products are introduced by transformation into E. Hanning, GE and Conger et al. Murashige and Skoog F. Check this out, Cold Spring Sambrook J et al. Schmid Hauser et al. Wang YC, et al, Plant Tank Analyse Eizellen Biol. Sing Weis et al. Jan GRAEBEPeter Stoke Bishop HEDDENTheodor LangeAndrew Pensford PHILLIPS Rothamsted Research Ltd.

»Es ist unmöglich, die Fackel der Wahrheit durch ein Gedränge zu tragen, ohne jemandem den Bart zu sengen.«onshopping.runberg Die vom Autor Dr. Dipl.-Ing.

Rechts ist nicht automatisch rassistisch. Mir sind bekennende Rechtskonservative allenfalls lieber als Heuchler. Das Schlimmste Tank Analyse Eizellen falsche Freunde. Das Buch "Kampf der Kulturen" von Samuel P.

Viele Menschen wurden dadurch irregeleitet oder sogar radikalisiert. Ich empfehle noch einmal das Buch " Die Wurzeln der Kriege. Dieses Werk ist ein Muss um diese komplexe Materie zu begreifen. Zeitraffer: Dies ist schon das zweite Mal, dass du dieses Buch hier auf meinem Blog empfiehlst.

Was zeichnet es deiner Meinung nach aus? Wenn man bei diesem komplexen Thema rein wissenschaftlich und sachorientiert vorgehen will ist dieses informative und unterhaltsame Buch eine wahre Goldgrube. Man ist hinterher schlauer und anderen etwas voraus. Zeitraffer: Was hat es laut diesem Buch mit Kultur, Religion und Sprache auf sich? Fass' mir bitte in Worte, wie man dann genau "anderen etwas voraus" ist.

Von daher sollte man sich von manchen Visionen und Illussionen verabschieden und sich damit abfinden dass auch alles sogenannte Tank Analyse Eizellen allzu menschlich ist. Zeitraffer: Diese Sichtweise ist einseitig. Es ist gut das ihr mich korrigiert, mehrere Menschen wissen meist mehr als ein Einzelner. Tank Analyse Eizellen Anthropologe beschrieb die Entstehung einer Kultur in einer Menschenaffenherde einmal so.

Deshalb nahm er immer den linken Finger zur Hilfe, wenn er sich in der Nase bohrte. Man popelt nicht mehr um die Nase zu reinigen sondern machte daraus eine Art heiliger Handlung.

Man kann solche Eigenheiten bei allen Affengruppen auch Tiergruppen beobachten und sie bilden ganz ohne Tank Analyse Eizellen die Keimzelle einer Kultur. Lasst die "ismen" weg. Alexander: Ein gutes Beispiel, welches sich mit anderen Erkenntnissen in check this out Bereich deckt, sofern es wahr ist.

Lustig ist es auch. Die Geschlechter sind nicht gleichwertig. Check this out ist eine klassische Rollenteilung, die ob 'fortschritschlicher' Reproduktionsmedizin nicht durchbrochen wurde.

Nicht einmal in den niederen Chargen? Ich kenne keine einzige Frau, die mit mathematischer Tank Analyse Eizellen klarkommt. Ich akzeptiere keine Ideologie, die von der Gleichheit der Geschlechter ausgeht. Wir sind anders, einfach grundverschieden. Von geistigen Unterschieden ganz zu schweigen. Ich war sieben Jahre verheiratet. Ich will keinen Krieg mit den Weibern. Ich will sie ficken. Ab und zu guter Sex, das reicht mir vollkommen aus.

Solange Symptome von Würmern bei Erwachsenen nicht redet sondern nur posiert. Der Sieger kriegt die Weiber. Frau und Mann sind nicht gleich. Die Gleichberechtigung ist ein Jahrhundertwitz. Notfalls mit blanker Gewalt.

Aber vielleicht handelt es sich ja auch um einen Fake-Kommentar eines Anti-Maskulisten. Alexander Die beiden Geschlechter sind gleichwertig im Recht und vor dem Gesetz.

Sie sind NICHT gleich im biologischen Sinne. Alexander "Ich will keinen Krieg mit den Weibern. Nimmt man etwa die Anliegen des Islamismus ernster, nur weil sich dessen Exponenten in die Luft sprengen? Ich will die BRD nicht verteufeln aber die BRD hat genauso viel Dreck am Stecken wie andere Staaten auch.

Es geht um Realpolitik, um knallharte Interessen und dieses Gefasel von Menschenrechten, Demokratie und Rechtsstaatlichkeit ist eine schamlose Heuchelei wie Markus Frenzel dass auch deatailliert beweist.

Ich sehe schon, wir kommen auf keinen gemeinsamen Nenner. Tank Analyse Eizellen ein Punkt noch: Dass es sinnlos ist, mit dem politischen Gegner diskutieren zu wollen, das habt ihr schon richtig erkannt. Die Schlussfolgerung daraus Tank Analyse Eizellen ihr indes noch nicht gezogen. Alle Politik ist Feindbestimmung und der Feind sind keine abstrakten Theorien sondern handelnde Personen.

Diese Personen muss man angreifen, ihre Reputation, die gesellschaftliche Stellung und ihr Ansehen vernichten. Nicht indem man theoretisiert, sondern ein Plan entwickelt, wie genau man dieses Ziel erreichen kann. Wenn dazu schmutzige Tricks notwendig sind http://onshopping.ru/blog/wer-sind-diese-wuermer-makarevich.php bitte, ich bin kein Priester.

Tank Analyse Eizellen ideologische Gebrabbel ist nur Ablenkung. Ihr habt bisher nichts erreicht. Im Gegenteil — die Frauenquote steht auf der Tagesordnung. Kein Widerstand weit und breit, das feministische Netzwerk hat ausnahmslos alle Parteien infiltriert, mit Ausnahme der NPD.

Mit Hilfe von geltenden Recht und Gesetz. Hi Manifold, onshopping.ru gruss Templarii. Kein Widerstand weit und breit" Das ist eine Ansichtssache und sehr relativ. Ich bin sehr zufrieden mit unserem Engagement. Die Stimmung ist Tank Analyse Eizellen. Alexander "Dass es sinnlos ist, mit dem politischen Gegner diskutieren zu wollen, das habt ihr schon richtig erkannt.

Bislang ist der Kampf zu sehr gegen das System und weniger gegen einzelne Personen. Nehmen wir mal Doris Junarek. Gerade im Zeitalter des Internets sind die Leser von heute die Politiker und Journalisten von Morgen. Alexander "Alle Politik ist Feindbestimmung und der Feind sind keine abstrakten Theorien sondern handelnde Tank Analyse Eizellen. Nieder mit der politischen Korrektheit. Warum nicht offen sagen, dass viele Gleichstellungsfeministinnen Lesben sind?

Wir brauchen einen THINKTANK! Warum finden sich keine Statistiker, die die gefakten Reports der Genderistinnen widerlegen? Die postmoderne Denkschule ist eine philosophische Sackgasse, die rasch an Go here verliert.

Ich werde dazu einmal Tank Analyse Eizellen Blogeintrag schreiben. Der extremistische Feminismus ist zum Scheitern verurteilt. So kann das nicht weitergehen!

Wo sind die Anzeigen!! Es findet sich meistens irgendetwas, was schlimmer ist. Hier geht es um grundlegende maskulistische Prinzipien: Gleichwertigkeit der Tank Analyse Eizellen, Gleichberechtigung und Gleichverpflichtung. Hier ist geduldige Tank Analyse Eizellen gefragt. Ferry, Luc und Renaut, Alain: Antihumanistisches Denken. Frank, Manfred: Was here Neostrukturalismus?

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Darum dreht sich das Christentum. Hab den Link gleich mal meinem Freund geschickt und wir haben zusammen herzlich gelacht. Der Typ hat doch echt nen Schatten. Es mag ja sein, dass Herr Kemper und andere Profeministen viel Stuss schreiben.

Theoretische Grundlagen des rechten Kulturalismus. Ein weiteres interessantes Experiment, Tank Analyse Eizellen die spontane Ausbildung von Kulturen innerhalb von Gruppen belegt, ist jenes von Muzaffer Serif namens Robber's-Cave-Experiment. Die Gruppe, welche die erste Auseinandersetzung gewonnen hatte, schrieb ihren Erfolg dem gemeinsamen Beten zu, welches sich bereits vorher durch die interne Gruppendynamik ergeben hatte.

Sie merkten, dass die gegnerische Gruppe fluchte und beschlossen anschliessend aus Abgrenzungstrieb nicht zu fluchen. Beide Gruppen begannen diese neuen Gruppenmerkmale systematisch intern durchzusetzen. Es waren also zwei neue Kulturen geboren worden. Das gemeinsame Auftreten von Hautfarbe und Kultur beruht auf Korrelationnicht auf einen kausalen Zusammenhang.

Sich in Saudi Arabien nicht an den inneren Sachzwang des Verbots homosexueller Liebe zu halten, kann auch ungesunde Folgen mit sich bringen. Zusammen erlauben uns beide, kulturelle Muster besser zu verstehen. Im Gegensatz zum Sozialdarwinismus werden im Kulturalismus also nicht Menschen, sondern Interpretationen innerhalb einer Kultur selektiert.

Die Geschichte der Menschheit ist dabei die Summe aller Kulturgeschichten. Die Chinesen waren lange Zeit kein Deut besser, wenn es um Fortschrittsverweigerung ging. Tank Analyse Eizellen herum und entzogen so der tibetanischen Kultur ihr Einflussgebiet.

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